2022年4月22日，《乳中乳過(guò)氧化物酶活性的測(cè)定 . 比色法》團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)由中國(guó)食品科學(xué)技術(shù)學(xué)會(huì)發(fā)布，并正式實(shí)施。該標(biāo)準(zhǔn)由光明乳業(yè)股份有限公司、上海市農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全中心、北京中檢葆泰生物技術(shù)有限公司和內(nèi)蒙古伊利實(shí)業(yè)集團(tuán)股份有限公司共同起草。

標(biāo)準(zhǔn)采用比色法檢測(cè)乳中乳過(guò)氧化物酶的活性，乳中乳過(guò)氧化物酶與底物3,3' ,5,5'-四甲基聯(lián)苯胺(TMB)發(fā)生氧化反應(yīng),生成藍(lán)色產(chǎn)物,加酸終止反應(yīng)后溶液變成黃色。在450 nm下測(cè)定溶液的吸光度,乳過(guò)氧化物酶的活性與吸光度成正比,通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線定量計(jì)算其酶活性。

試劑和材料

乳過(guò)氧化物酶活性試劑，或Evergreen乳過(guò)氧化物酶活性試劑盒。注：Evergreen乳過(guò)氧化物酶活性試劑盒由北京中檢葆泰生物技術(shù)有限公司提供。

樣品提取

吸取10.00 mL樣品，置于15 mL離心管中，加入0.6 mL樣品處理溶液，渦旋混勻，靜置5~10 min，3000g離心10 min，用濾紙過(guò)濾，收集濾液待測(cè)。

測(cè)定

取出所需數(shù)量的微孔板，并做好標(biāo)記。吸取50 μL濾液和系列標(biāo)準(zhǔn)溶液分別加至微孔中，加入50 μL乳過(guò)氧化物酶底物溶液（TMB），吹打混勻，室溫避光孵育15 min。孵育結(jié)束后，向每個(gè)微孔中加入100μL終止液，吹打混勻后，立即用酶標(biāo)儀在450nm下讀取并記錄每個(gè)微孔的 OD值。